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SaCas9 Nuclease识别5'-NNGRRT-3'PAM序列，较长的PAM序列具有更高的特异性。此外，该酶蛋白分子量相对于SpCas9较小，在电转时具有更高的转化效率。本产品提供的Cas9核酸内切酶通过在蛋白两端加了核定位信号（NLS），可使蛋白进入细胞核内进行基因组编辑。


CRISPR/Cas9是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统。CRISPR/Cas9系统将入侵噬菌体和质粒DNA的片段整合到CRISPR序列中，并利用相应的CRISPR RNAs（crRNAs）来指导Cas9蛋白对同源序列的降解，从而提高免疫性。人工改造过的Cas9/sgRNA系统通过sgRNA（short guide RNA）引导Cas9蛋白识别并剪切带有sgRNA靶点的双链DNA，可用于基因敲除和精确编辑DNA等操作。

• 可显著降低脱靶效应；
  
• 纯蛋白体系，避免CRISPR基因敲除时引入质粒或病毒干扰。

• 基于蛋白与sgRNA转染的病毒载体CRISPR基因敲除；
  
• 基于蛋白与sgRNA转染的病毒载体CRISPR基因敲入；
  
• sgRNA剪切靶点DNA效率检测，降低体内筛选成本；
  
• 体外剪切靶DNA的特异位点。

图1．SaCas9 Nuclease做DNA片段切割活性检测。带有靶位点的DNA片段为1500bp，酶切后的片段为1000bp和500bp。

组分	规格
SaCas9 Nuclease(1μg/μL)	50μL
10×SaCas9 Reaction Buffer	500μL

保存：-20℃


20mM HEPES，500mM KCl，0.1Mm DTT，1% Sucrose，pH7.5@25℃。

• 经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，纯度达95%；
  
• 内毒素含量<100EU/mg；
  
• qPCR方法检测无大肠杆菌基因组残留；
  
• 无RNase、核酸内、外切酶污染。

• 按下表加入各成分配制20μL体外切割体系。
  

  成分	用量
  dsDNA	200ng
  sgRNA	200ng
  SaCas9 Nuclease	0.2～1μg
  10×SaCas9 Reaction Buffer	2μL
  RNase-Free Water	至20μL

  
  注：在反应体系中可添加RNase Inhibitor至1U/μL，防止dsDNA不纯导致sgRNA的降解。
  
• 37℃反应1小时。
  
• 70℃加热10分钟。

货号	名称	说明
JN0065	NLS-Cas9 Nuclease
JN3003	Cas9 D10A Nickase	能在与sgRNA靶序列互补的DNA链上产生切口，从而形成功能性的单链断裂，可以减少意外的脱靶基因修饰。
JN3004	Cas9 H840A Nickase	能在与sgRNA靶序列非互补的DNA链上产生切口，从而形成功能性的单链断裂，可以减少意外的脱靶基因修饰。
JN3005	Cas9(D10A,H840A)Nuclease	为Cas9 D10A和H840A双突变失活酶，具有靶DNA结合活性，但无切割活性，可用于阴性对照等用途。

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